发布时间:3/16/2022 4:21:00 PM

各类高效液相色谱法:

    (一)液固吸附色谱法(LSC)流动相为液体,固定相为固体吸附剂;1.分离机制:利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力差异;分离前提:K不等或k不等;2.固定相:与LC比,固定相粒径不同(<10μm);3.流动相:底剂(烷烃)+有机极性调节剂;例:正己烷或庚烷+氯仿;4.影响K的因素:与固定相性质和流动相性质有关;溶质分子极性↑,洗脱能力↓,k↑,tR↑;溶剂系统极性↑,洗脱能力↑,k↓,tR↓;注:调节溶剂极性,可以控制组分的保留时间;5.出柱顺序:强极性组分后出柱,弱极性组分先出柱;6.硅胶吸水量↑,LSC→LLC硅胶含水量较小,吸附色谱,硅胶极性较大;硅胶含水量>17% ,分配色谱,硅胶失活→载体;吸附的水→固定液

    (二)液-液分配色谱法(LLC)1.分离机制:利用组分在两相中溶解度的差异2.固定相:载体+固定液(物理或机械涂渍法)缺点:系统内部压力大,易流失,不实用。固定液-极性→NLLC,固定液-非极性→RLLC。3.①正相色谱-固定液极性>流动相极性(NLLC)极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱:适于分离极性组分;②反相色谱-固定液极性<流动相极性(RLLC)极性大的组分先出柱,极性小的组分后出柱:适于分离非极性组分;

    (三)化学键合相色谱法(BPC)1.化学键合相 (1)分离机制:分配+吸附(以LLC为基础);(2)特点:1)不易流失;2)热稳定性好;3)化学性能好;4)载样量大; 5)适于梯度洗脱;2.反相键合相色谱(1)分离机制:疏溶剂理论;正相-流动相与溶质排斥力强,作用时间↑,K↑,组分tR↑;反相-流动相与溶质排斥力弱,作用时间↓,K↓,组分tR↓;(2)固定相:极性小的烷基键合相;C8柱,C18柱(ODS柱-HPLC约80%问题);(3)流动相:极性大的甲醇-水或乙腈-水;流动相极性>固定相极性;底剂+有机调节剂(极性调节剂);例:水+甲醇,乙腈,THF;(4)流动相极性与k的关系:流动相极性↑,洗脱能力↓,k↑,组分tR↑(5)出柱顺序:极性大的组分先出柱;极性小的组分后出柱;(6)适用:非极性~中等极性组分(HPLC 80%问题)3.正相键合相色谱(1)分离机制:溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键作用力(2)固定相:极性大的氰基或氨基键合相;(3)流动相:极性小(同LSC);底剂+有机极性调节剂;例:正己烷+氯仿-甲醇,氯仿-乙醇;(4)流动相极性与K的关系:流动相极性↑,洗脱能力↑,组分tR↓,k↓;(5)出柱顺序:结构相近组分,极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱;(6)适用:氰基键合相与硅胶的柱选择性相似(极性稍小),分离物质也相似;氨基键合相与硅胶性质差别大,碱性,分析极性大物质、糖类等;4.离子对色谱和离子抑制色谱,反相离子对色谱法(IPC或PIC)反相色谱中,在极性流动相中加入离子对试剂,使被测组分与其中的反离子形成中性离子对,增加K和tR,以改善分离;(1)离子对试剂:烷基磺酸钠→分析碱,四丁基季胺盐→分析酸。(2)影响K的因素: a.与m的极性有关(同反相色谱);b.与R的链长有关:R↑长,极性↓小,tR↑,k↑;(3)适用:较强的有机酸、碱;反相离子抑制色谱;在反相色谱中,通过加入缓冲溶液调节流动相pH值,抑制;组分解离,增加其K和tR,以达到改善分离目的;1)离子抑制剂:弱酸、弱碱性物质; pH一定的缓冲溶液;2)K的影响因素:与流动相极性有关,还与pH值有关;选择流动相:应同时考虑极性及pH值;酸性物质-加入酸HAc,tR↑,K↑;碱性物质-加入碱NH3·H2O,tR↑,K↑;  调节pH范围:3.0~8.0;pH>8.0破坏键合相与载体的结合;pH<3.0腐蚀柱子;3)适用:极弱酸碱物质;pH=3~7弱酸;pH=7~8弱碱;两性化合物;

---本文摘自《实验与分析》

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